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第四节经典液相色谱法

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一、液-固吸附色谱 (一)分离原理 (二)常用吸附剂 (三)吸附剂和流动相的选择 (一)分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离 (二)常用吸附剂:多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 1. 硅胶(SiO2· H2O) 结构:内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性: 1)与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑,吸附能力↑→强极性吸附中心,不易洗脱 吸附活性次序:活泼型>束缚型>游离型 2)吸水→失活 →105~110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失,无吸附力 适用:分析酸性或中性物质 续前 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9~10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH>7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4~5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强,组分越后出柱 (三)吸附剂和流动相的选择: 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质(极性大小): 烃< - - - - - - - - <羧酸,醇 2. 吸附剂的活性: 吸附剂的活性↑大,对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性: 流动相极性↑大,对被测组分的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 :根据组分性质、吸附剂的活 性, 选择适当极性的流动相 续前 4. 三者关系图示: 组分 吸附剂 极性 活性小 非(弱)极性 活性大 流动相 极性 非极性或弱极性 二、薄层色谱法 (一)概述 (二)定性参数 (三)吸附剂的选择 (四)展开剂的选择 (五)薄层板的制备 (六)定性与定量分析 (一)概述 1.定义:将固定相均匀涂布在表面光滑的*板上, 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2.操作过程:见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3 .分离机制:吸附(分配,离子交换,空间排阻) 4.特点:分析快速、灵敏、显色方便 5.应用:药物杂质检查、纯度测定 next 图示 图示 L0 L2 L1 (二)定性参数 1. 比移值Rf 设R’ 为单位时间内一个分子在展开剂中出现的几率 设1 ? R’ 为单位时间内一个分子在固定相中出现的几率 定时展开保留比 u R L1 t L1 R' ? ? ? u 0 L0 t L0 ( R' ? 1) 原点到组分斑点质量中 心的距离 L1 Rf ? ? 原点到溶剂前沿的距离 L0 VS 1 又? ? 1 ? K ? R' Vm L0 ? L1 ? K ? VS Vm ? L1 续前 Vm 1 ? R f ? R' ? ? 1 ? K ? VS Vm Vm ? K ? Vs K ?? R f ? ? 讨论 Rf与K有关,即与组分性质(溶解度)以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定,Rf只与组分性质有关,是薄层色谱 基本定性参数,说明组分的色谱保留行为 续前 1)K↑大,Rf↓小 2)薄层板一定,对于极性组分 展开剂极性↑大,Rf↑大(容易洗脱) 展开剂极性↓小,Rf↓小 (不容易洗脱) 3)Rf范围:0< Rf <1 (组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离) Rf = 0.2——0.8(常用) 0.3——0.5(最佳) 续前 2. 相对比移值Rs L1 原点到组分斑点质量中 心的距离 Rs ? ? ? R f(参) 原点到参考物斑点质量 中心的距离 L2 ? R f(组) 讨论 ? ? ? 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差,大大提高重现性和可靠性; 参考物可以是后加入纯物质,也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关, 范围可以大于或小于1 (三)吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂 (四)展开剂的选择(同液固吸附色谱流动相的选择) 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性 (五)薄层板的制备 定性分析——窄条 定量分析——10×20cm 硅胶G——自含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂,铺板时另加入CMC 硅胶FH254——含荧光剂,254nm紫外光照发绿光 硅胶FH365——含荧光剂,365nm紫外光照发光 (六)定性与定量分析 定性分析——日光,紫外光,显色 定量分析——洗脱法,薄层扫描法 四、纸色谱法 将固定相放在纸上,以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法 ? ? ? ? 固定相:纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂(饱和正丁醇) 分离机制:同液-液分配色谱 1 定性参数: R ? f 1 ? K ? V S Vm ? 讨论:Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留,Rf 小(流动相极性↑, Rf ↑) 非极性组分→易流出,Rf大(流动相极性↑,Rf ↓)



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